产地 | 上海 |
保存条件 | 2-9°C |
品牌 | 化邦 |
货号 | HB-Y65521J |
用途 | 用于科研实验 |
检测方法 | 酶联免疫法 |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | 人,大鼠,小鼠,兔子,植物,鱼等 |
检测限 | |
数量 | 55 |
包装规格 | 96t/48t |
标记物 | |
样本 | 血清组织等 |
应用 | 用于科研实验 |
是否进口 | 否 |
神经鞘氨醇(Sphingosine)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的:
本试剂盒用于测定样本中神经鞘氨醇(Sphingosine)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中神经鞘氨醇(Sphingosine)水平。用纯化的神经鞘氨醇(Sphingosine)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入神经鞘氨醇(Sphingosine),和HRP标记的神经鞘氨醇(Sphingosine)抗原,使它们竞争结合,经过 洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的神经鞘氨醇(Sphingosine)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中神经鞘氨醇(Sphingosine)的含量。
试剂盒组成
1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
8 |
标准品S1(800ng/L) |
0.5ml×1瓶 |
2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
标准品S2(400ng/L) |
0.5ml×1瓶 |
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3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
标准品S3(200ng/L) |
0.5ml×1瓶 |
|
4 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
标准品S4(100ng/L ) |
0.5ml×1瓶 |
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5 |
显色剂B液 |
6ml×1瓶 |
标准品S5(50ng/L) |
0.5ml×1瓶 |
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6 |
终止液 |
6ml×1/瓶 |
9 |
说明书 |
1份 |
7 |
样品稀释液 |
6ml×1/瓶 |
10 |
封板膜 |
2张 |
标本要求
1.标本处理:(1)水样 采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查
(2)组织 样品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线, 做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔 孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请 乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
检测范围:
20ng/L -1000ng/L
规格:
96份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月